La Real Maestranza de Caballería se puso bajo la advocación de la Stma. Virgen del Rosario, su Patrona y Señora, cuya imagen con el Niño Jesús, obra del escultor Cristóbal Ramos, preside el magnífico altar barroco de la Capilla de la Corporación.
En el título II de las Ordenanzas vigentes titulado «Del patrocinio y obligación a la Virgen del Rosario», se habla de lo importante de «cuidar del adorno y decencia en el culto de Nuestra Patrona». En la festividad de la Virgen del Rosario se celebra en esta Capilla una Solemne Función a la que acuden los miembros de la Corporación y sus familias.
La actual Capilla de Nuestra Señora del Rosario, anexa a la Casa de la Real Maestranza e inaugurada en 1956, tiene su antecedente en otra anterior, construida en el siglo XVII, por la Real Maestranza de Caballería. Esta antigua Capilla estaba situada dentro de la iglesia del desaparecido Convento de Regina Angelorum. En ella trabajaron los mejores artistas de la ciudad, como el escultor Pedro Roldán, Dionisio de Ribas, que se hizo cargo del retablo. Pedro Roldán es también el autor de la reja original, un hermoso ejemplo de la rejería sevillana, que se encuentra hoy en la Puerta del Príncipe de la Plaza de Toros.
Cuando en 1905 fue demolida esta Capilla por necesidades urbanísticas, se recogió y guardó en los almacenes de la Corporación todo lo que pudo ser rescatado del edificio: retablo, imagen, yeserías, zócalo y otros elementos que se utilizaron más tarde, en la Capilla actual.
Abierta al culto en ocasiones, ya que todos los domingos se celebra en ella la Santa Misa, la Capilla de la Real Maestranza suele ser escogida por los Caballeros Maestrantes y familias para celebrar bodas y otros actos litúrgicos.
